人非小細胞肺癌細胞(HCC827)
細胞介紹
這株細胞建于 1994 年三月。這株肺腺癌在 EGFR 酪氨酸激酶區(qū)域有一個獲得性突變(E746-A750 缺失)。患者在 25 歲到 26 歲時每個月抽 1 包煙。在診斷前 12 年不再抽煙。
 
細胞特性
1.  來源：肺腺癌
2.  形態(tài) ：上皮細胞樣
3.  含量：>1x10 6 個/mL
4.  污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5.  規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
 
運輸和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移10cm 培養(yǎng)皿或者 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 
人非小細胞肺癌細胞(HCC827)細胞用途：僅供使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基 及 培養(yǎng) 凍存 條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO 3 1.5g/L,D-葡萄糖 2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
二． 細胞 處理 ：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約 1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加 10%DMSO 后進行凍存。
 
人非小細胞肺癌細胞(HCC827)注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。